1,06 Mb. страница2/8Дата конвертации27.09.2011Размер1,06 Mb.Тип ... Смотрите также: 2 ^ Осаждение белков минеральными кислотами Ход работы. В пробирку осторожно наливают около 1 мл концентрированной азотной кислоты. Затем, наклонив пробирку, медленно, по стенке добавляют 1 мл 1%-го раствора белка. На границе двух жидкостей появляется осадок в виде белого кольца. Такую же реакцию проделывают с концентрированной соляной и серной кислотами. ^ Осаждение белков солями тяжелых металлов Ход работы. В три пробирки наливают по 1 мл 1%-го раствора белка и добавляют по 3-4 капли: в первую пробирку ЂЂЂ 7%-го раствора сульфата меди, во вторую ЂЂЂ 5%-го раствора ацетата свинца, в третью ЂЂЂ 5%-го раствора нитрата серебра. Во всех пробирках образуется осадок. Осаждение белков органическими осадителями ^ Осаждение белка органическими кислотами Ход работы. В 2 пробирки наливают по 2 мл 1%-го раствора белка и добавляют: в одну пробирку 4-5 капель 10%-го раствора сульфосалициловой кислоты, в другую ЂЂЂ 5-10 капель 10%-й трихлоруксусной кислоты (CCl3COOH). Выпадает осадок белка. ^ Осаждение белка органическими растворителями Ход работы. К 1 мл 1%-го раствора белка добавляют 2 мл органического растворителя (96%-го этанола, хлороформа, ацетона или эфира) и перемешивают. Образование осадка можно усилить добавлением нескольких капель насыщенного раствора хлорида натрия.^ Осаждение белков реактивами на алкалоиды Ход работы. В три пробирки наливают по 1 мл 1%-го раствора белка, по 4-5 капель 1%-го раствора уксусной кислоты и по 2-3 капли: в первую пробирку ЂЂЂ 10%-го раствора пикриновой кислоты, во вторую ЂЂЂ насыщенного раствора танина, в третью ЂЂЂ 5%-го раствора железистосинеродистого калия. Наблюдают выпадение осадка. 3. Осаждение белков при нагревании ^ Ход работы. В пять пробирок наливают по 0,5 мл 1%-го раствора яичного белка. Содержимое первой пробирки нагревают до появления опалесценции (помутнения раствора). К раствору белка во второй пробирке осторожно добавляют 1 каплю 1%-го раствора уксусной кислоты, нагревают и наблюдают вначале появление опалесценции, а затем выпадение белого хлопье-видного осадка белка. Это объясняется тем, что белок теряет заряд и находится в изоэлектрическом состоянии. К раствору белка в третьей пробирке добавляют 1-2 капли 10%-го раствора уксусной кислоты и нагревают. Осадок не образуется, так как в кислой среде частицы белка перезаряжаются и приобретают положительный заряд. К раствору белка в четвертой пробирке добавляют 1-2 капли 10%-го раствора уксусной кислоты, 1 каплю насыщенного раствора хлорида натрия и нагревают. Выпадает осадок вследствие адсорбции ионов электролита (образование двойного электрического слоя) и нейтрализации заряда на частицах белка. К раствору белка в пятой пробирке добавляют 1 каплю 10%-го раствора гидроксида натрия и нагревают. Осадок не образуется, так как в щелочной среде отрицательный заряд на частицах белка усиливается.Обратимое осаждение белков (высаливание) При добавлении к водным растворам белков сульфатов или хлоридов щелочных и щелочно-земельных металлов (Na2SO4, NaCl, MgSO4 и др.) происходит дегидратация и нейтрализация белковых частиц, при этом белки выпадают в осадок без изменения нативной структуры. Такой тип осаждения белков называется высаливанием. Высаливание ЂЂЂ обратимый процесс, и после удаления соли (разбавлением водой, диализом) белок вновь приобретает природные свойства. Поскольку разные белки высаливаются при различных концентрациях солей, этот метод используется для фракционирования белков. Для разделения белков методом высаливания широко применяется сульфат аммония.^ Фракционное осаждение белков плазмы крови сульфатом аммония Принцип метода. Фибриноген выпадает в осадок при 33%-м насыщении плазмы сернокислым аммонием, глобулины ЂЂЂ при полунасыщении, а альбумины ЂЂЂ при полном насыщении. ^ Ход работы К 2 мл плазмы крови (для измерения объемов жидкостей в данном опыте используют мерные пробирки) добавляют 5 мл дистиллированной воды, 3,5 мл насыщенного раствора сульфата аммония и перемешивают. В осадок выпадает фибриноген (можно наблюдать лишь незначительное помутнение), который отделяют фильтрованием. Наличие белка на фильтре проверяют биуретовой реакцией: для этого воронку с фильтром переносят в чистую пробирку и на фильтр наливают 1 мл 10%-го раствора гидроксида натрия и 1 каплю 1%-го раствора сульфата меди. Фильтрат (ЂЂЂ 1) используют для дальнейшей работы. К 4 мл фильтрата ЂЂЂ 1 добавляют 4 мл насыщенного раствора сульфата аммония и перемешивают. В осадок выпадают глобулины, которые отделяют фильтрованием. Получают осадок, с которым проделывают биуретовую реакцию, и фильтрат ЂЂЂ 2. К фильтрату ЂЂЂ 2 добавляют при постоянном перемешивании стеклянной палочкой кристаллический сульфат аммония до насыщения (пока соль не перестанет растворяться). Выпадают в осадок а
Осаждение белков минеральными кислотами - И коллоидная химия
Комментариев нет:
Отправить комментарий